細胞培養(yǎng)是生物學研究中,一類重要的實驗方法。細胞養(yǎng)不好,細胞生物學研究也就無從談起。影響細胞培養(yǎng)狀態(tài)的因素有很多,細胞的密度,就是其中重要的一項。
通常,細胞密度是指每單位面積或體積的細胞數(shù)。
細胞培養(yǎng)的適宜細胞密度取決于特定的細胞類型和培養(yǎng)目的。不同的細胞由于來源不同,特性也會有所不同,有的細胞比較依賴于高密度才能生長,所以在進行復蘇、傳代等操作時需要注意。
生長速度慢的細胞,譬如內(nèi)皮細胞,初始細胞密度略高一些,生長狀態(tài)會比較好;還有一些細胞生長速度比較快,如巨噬細胞或某些腫瘤細胞,初始細胞密度較低更有利于其狀態(tài)的調(diào)整。
那么細胞密度究竟是如何影響細胞培養(yǎng)的?
首先,細胞密度直接影響細胞的生長速率。在細胞密度較低的情況下,細胞有更多的空間和養(yǎng)分供應(yīng),因此可以更快地生長和繁殖。但是,在細胞密度過高的情況下,細胞之間會發(fā)生競爭,養(yǎng)分和空間變得有限,導致細胞的生長速率減緩。因此,細胞密度應(yīng)該適當控制,以保證細胞的生長速率和細胞數(shù)量的平衡。
其次,細胞密度還會影響細胞的分化。在細胞密度較低的情況下,細胞會傾向于分化為較多的類型,而在細胞密度較高的情況下,細胞則更可能傾向于保持未分化狀態(tài)。這是因為細胞在低密度情況下感受到更少的細胞-細胞相互作用,從而導致細胞分化。而在高密度情況下,細胞之間的相互作用增加,導致細胞更傾向于維持未分化狀態(tài)。
此外,細胞密度還會影響細胞的代謝。
在細胞密度較低的情況下,細胞需要更多的營養(yǎng)物質(zhì)來維持其生長和繁殖,從而導致代謝速率的增加。但是,在細胞密度過高的情況下,細胞之間的相互作用和競爭增加,細胞需要更多的代謝產(chǎn)物才能生存和生長,從而導致代謝速率的降低。
在了解細胞密度對細胞培養(yǎng)的影響后,我們要做的就是將理論應(yīng)用于實戰(zhàn)。細胞密度的調(diào)控可以通過改變細胞的種植密度、培養(yǎng)容器的大小以及細胞營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)量等多種方式來實現(xiàn)。
細胞接種密度的調(diào)整
細胞實驗過程中,常用血球計數(shù)板對細胞密度進行測定。隨著科技的發(fā)展,更為先進的細胞計數(shù)儀得到推廣,使得計算細胞密度更為高校和準確。
細胞培養(yǎng)容器的選擇
一般情況下,塑料器皿更適合生長速度比較慢的細胞,玻璃器皿更適合生長速度快的細胞;對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候(比如細胞剛復蘇時或者原代培養(yǎng)),塑料器皿的培養(yǎng)效果相對更好;而在其生長旺盛的時候,玻璃器皿則相對更好。
注意:以上情況只提供規(guī)律及思路,還需根據(jù)自身實驗具體情況而定。
細胞營養(yǎng)物質(zhì)的供給
通過調(diào)整培養(yǎng)液的營養(yǎng)物質(zhì)濃度和供應(yīng)量來達到相應(yīng)的細胞密度,根據(jù)細胞的生理特性,調(diào)節(jié)血清與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的比例,或者各類生長因子與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的比例,來調(diào)控細胞的生長速率,進而調(diào)控細胞密度。
細胞實驗需要用到胎牛血清。作為一種重要的添加成分,胎牛血清品質(zhì)的優(yōu)劣,在一定程度上決定了細胞實驗結(jié)果是否理想。
遠慕生物供應(yīng)進口特級胎牛血清,采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。富含各類的生長發(fā)育因子,理論上支持各種細胞的生長。出廠前均應(yīng)經(jīng)過嚴格質(zhì)控,并附詳細《檢測報告》,血清從出廠,到實驗室,全程低溫冷鏈保護,盡可能避免血清反復凍融。