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人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1317 更新時(shí)間:2016-07-07

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

 

人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

試劑盒名稱(chēng)】

人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒

【試劑盒用途】

定量檢測(cè)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗BB抗體(BB-Ab)的含量。

【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被抗BB抗體(BB-Ab)透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中抗BB抗體(BB-Ab)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中抗BB抗體(BB-Ab)含量。

【試劑盒組成】

1

酶標(biāo)包被板

12×8

7

底物夜A

6mL

2

標(biāo)準(zhǔn)品200ng/ml

0.6mL

8

底物夜B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

20mL

9

終止液

6mL

4

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

10

說(shuō)明書(shū)

1

5

稀釋液

6mL

11

封板膜

1

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封袋

1個(gè)

備注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml

 

人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

1、37恒溫箱

  • 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

【操作步驟】

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。

7、溫育:重復(fù)4的操作。

8、洗板:重復(fù)5的操作。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。

10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)

12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程,再根據(jù)OD,回歸方程計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

【人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml,超過(guò)此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(0.1-200ng/ml范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

7、免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。

9、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

 

【操作程序總結(jié)】

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品  加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算

【檢測(cè)范圍】

0.1-200ng/ml

【規(guī)格】

96T/盒、48T/盒

【貯藏】

2-8℃,避光防潮保存。

【有效期】

6個(gè)月

【供應(yīng)商】

上海遠(yuǎn)慕生物

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