上海遠(yuǎn)慕生物詳細(xì)為您介紹miRNA提取試劑盒操作說(shuō)明書,用途,注意事項(xiàng),品牌,價(jià)格等,本司是美國(guó)Omega品牌代理商,代理旗下所有產(chǎn)品,部分系列有:96孔板RNA 提取試劑盒I,96孔板病毒總RNA純化試劑盒,磁珠病毒DNA/RNA純化試劑盒,磁珠組織RNA提取試劑盒,RNA室溫保護(hù)液,RNA保護(hù)液,微量病毒DNA/RNA共提取試劑盒,其他系列等,價(jià)格實(shí)惠,訂購(gòu)!
名稱:miRNA提取試劑盒
品牌:Omega
供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕
用途:從細(xì)胞、動(dòng)物、植物組織中同時(shí)提取小分子RNA或大分子RNA
miRNA提取試劑盒的提取目前主要采用兩種方法:Trizol法和離心柱法,操作步驟極為簡(jiǎn)單、無(wú)需過(guò)柱、去大RNA/DNA、再沉淀等復(fù)雜的步驟,即可獲得高產(chǎn)量、高純度、不含大RNA的小RNA。適用于高通量提取,2h內(nèi)可完成24個(gè)樣品的提取工作。應(yīng)用該miRNA提取試劑盒提取的小RNA(Small RNA)中,長(zhǎng)度在15~200nt范圍的RNA>90%,基本不含有大RNA和DNA。
RNA提取試劑盒工作原理:
首先采用一種包含非離子型洗滌劑的特殊細(xì)胞裂解緩沖液進(jìn)行樣品均質(zhì)化。由于蛋白質(zhì)保持完整,因此可取一部分裂解液直接用于常規(guī)蛋白質(zhì)分析應(yīng)用。剩余裂解液則采用了結(jié)合有機(jī)和固相提取優(yōu)勢(shì)、同時(shí)避免二者劣勢(shì)的操作程序進(jìn)行RNA的分離。
1.用1ml RNA-Solv® Reagent裂解細(xì)胞或組織(50-100mg植物組織),勻漿;
2.將勻漿液在室溫下靜置2-3min ;
3.向勻漿液中加入200μLlvfang,蓋緊離心管的蓋,劇烈振蕩15s,冰浴10min;
4.4℃,12000g,15min離心。勻漿分離為下層的有機(jī)相和上層的水相。RNA 留在上層水相中;
5.轉(zhuǎn)移不超過(guò)80%體積的上清至一新的2.0ml離心管中,加入 1/2體積的無(wú)水乙醇,振蕩混勻;
6.渦旋振蕩第5步中的混合物,然后將混合物全部轉(zhuǎn)移至2mL HiBind® RNA Mini column中(每次吸取不超過(guò)700μL液體,多余700μL時(shí)逐次加入)。室溫下10000*g離心30-60s,轉(zhuǎn)移流出液至新的2ml離心管中(注意記錄轉(zhuǎn)移出的體積),以用于分離小RNA。
7.加入0.9倍流出液體積的無(wú)水乙醇至第6步的離心管中,渦旋振蕩混勻。取 一個(gè)HiBind® RNA Mini column,置于一個(gè)新的2ml收集管中;
8. 取第7步的混合物加入吸附柱中,棄流出液;
9. 重復(fù)步驟8,將剩余樣品加入吸附柱中,10000g,30-60s,棄流出液;
10. 將吸附柱放在同一個(gè)2ml收集管中,添加500μl RWB Wash Buffer, 10000g,30-60s,棄流出液,重復(fù)使用收集管在第11步;
11. 再次添加500μL RWB Wash Buffer洗柱,如第10步。10000g,30-60s離 心,棄流出液。使用一空收集管,13000g,2min,來(lái)*干燥HiBind®matrix;
12.洗脫miRNA。轉(zhuǎn)移吸附柱至一新的1.5ml離心管中并在膜上加入15-30μL DEPC水(70℃預(yù)熱效果更佳)。室溫靜置5min,然后 13000g 1min 離心。如果預(yù)期的RNA超過(guò)20μg,進(jìn)行二次洗脫。
標(biāo)簽:RNA提取試劑盒 miRNA提取試劑盒