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中文名:總蛋白檢測試劑盒(雙縮脲微板法)
供應商:上海遠慕
規(guī)格:120T
有效期: 12個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。
用途:定量檢測血清、組織樣本中總蛋白含量。
本產說明:酶標儀檢測540nm處吸光值。
系列:生化檢測
適用范圍:本試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
總蛋白檢測試劑盒(雙縮脲微板法)多用于人或動物血清、血漿、組織等樣本中的總蛋白含量測定。雙縮脲反應的原理是在呈藍色的堿性硫酸銅溶液存在的情況下,銅離子與肽鍵形成有色螯合的銅復合物,呈紫色,所產生的顏色密度與參與反應肽鍵數成比例??赏ㄟ^比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。雙縮脲法測定蛋白濃度兼容性亦很好,不受大部分樣本中其他成分的影響,但易受銅離子螯合劑影響。
總蛋白檢測試劑盒(雙縮脲微板法)操作步驟:
1.取1ml蛋白標準配制液或稀釋液加入到蛋白標準中,充分溶解后配制成20mg/ml的 蛋白標準溶液,配制后可立即使用,溶解后的蛋白標準溶液應-20℃保存。亦可按自己試驗要求繼續(xù)進行稀釋,如稀釋至1mg/ml。特別提示:待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測蛋白溶解于蔗糖中,亦取蛋白標準溶解于蔗糖中。一般也可以用NaCl或PBS作為溶解白蛋白標準品的稀釋液。
2.鹽水或PBS,冰浴下勻漿后,離心,取上清待檢。
3.TP加樣操作,按下表依次加入試劑:
4.混勻,孵育。
5.準孔和各待測孔的吸光度。
6.當遇到渾濁或溶血樣本等,可設”樣本空白孔”:取待測樣品加入雙縮脲空白試劑,以雙縮脲空白試劑調零,讀取樣本空白孔吸光度。用待測孔吸光度減去標本空白孔吸光度后的凈吸光度,計算總蛋白濃度。
總蛋白檢測試劑盒(雙縮脲微板法)注意事項:
1.蛋白標準粉末溶解于蛋白標準配制液后,即獲得蛋白標準原液,該原液中含有防腐劑, 不影響后續(xù)檢測,該蛋白標準原液-20℃長期保存。
2.待測蛋白和蛋白標準加入雙縮脲試劑后,如果發(fā)現檢測效果不佳,可以室溫放置1h或 60℃放置15min,顏色會隨著時間的延長不斷加深。
3.測定標準曲線時發(fā)現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化,可能的原因 是樣品中含有銅離子螯合劑。
4.如果沒酶標儀,也可以使用分光光度計測定。使用分光光度計測定蛋白濃度時,每個 試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
5.檢測中發(fā)現所有孔都呈暗紫色,可能原因是樣品含有還原劑,應適當透析或稀釋樣品。