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關(guān)于細(xì)胞自噬問(wèn)題,遠(yuǎn)慕為您解答~
點(diǎn)擊次數(shù):964 更新時(shí)間:2021-05-13

一、自噬體介紹
自噬(Autophagy),或稱自體吞噬,是一個(gè)涉及到細(xì)胞自身結(jié)構(gòu)通過(guò)溶酶體機(jī)制而被分解的過(guò)程,該過(guò)程是一個(gè)受到緊密調(diào)控的步驟,幫助細(xì)胞產(chǎn)物在合成、降解以及接下來(lái)的循環(huán)中保持一個(gè)平衡狀態(tài)。細(xì)胞接受自噬誘導(dǎo)信號(hào)后,在胞漿的某處形成一個(gè)扁平的類似“脂質(zhì)體”樣的膜結(jié)構(gòu),稱為Phagophore。隨著Phagophore不斷延伸,將胞漿中的細(xì)胞器等成分,全部包裹住成為密閉的結(jié)構(gòu),稱為“自噬體(autophagosome)”。自噬體形成后,可與溶酶體融合,自噬體中的內(nèi)容物隨即被降解,產(chǎn)物(氨基酸、脂肪酸等)被輸送到胞漿中,供細(xì)胞重新利用,而殘?jiān)虮慌懦黾?xì)胞外或滯留在胞漿中。自噬信號(hào)通路:


 二、自噬研究策略和方法
正常細(xì)胞基礎(chǔ)水平自噬活性比較低,對(duì)自噬研究通常需要進(jìn)行人工調(diào)節(jié)和干預(yù),常用藥物有:
1、自噬誘導(dǎo)劑
a) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;
b) Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chloride(氯化鋰):IMPase 抑制劑(即Inositol monophosphatase,肌醇單磷酸酶);
c) Earle's平衡鹽溶液:制造饑餓;
d) N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):Class I PI3K Pathway抑制劑;
e) Rapamycin:mTOR抑制劑;
f) Xestospongin B/C:IP3R阻滯劑。
2、自噬抑制劑
a) 自噬抑制劑3-Methyladenine(3-MA):(Class III PI3K) hVps34 抑制劑;
b) Bafilomycin A1:質(zhì)子泵抑制劑;
c) 溶酶體抑制劑Hydroxychloroquine(羥氯喹)。


3、自噬檢測(cè)
1) 透射電鏡;
電鏡作為自噬檢測(cè)的金指標(biāo)。由于自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),普通光鏡下觀察不到自噬體的形成,因此,直接觀察自噬體需在透射電鏡下。Phagophore的特征為:新月?tīng)罨虮瓲睿p層或多層膜,有包繞胞漿成分的趨勢(shì)。自噬體(AV1)的特征為:雙層或多層膜的液泡狀結(jié)構(gòu),內(nèi)含胞漿成分,如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體等。自噬溶酶體(AV2)的特征為:?jiǎn)螌幽ぃ麧{成分已降解。
2) WB檢測(cè)標(biāo)志物L(fēng)C3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1;
a)利用Western Blot檢測(cè)LC3-II/I比值的變化以評(píng)價(jià)自噬形成。自噬形成時(shí),胞漿型LC3(即LC3-I)會(huì)酶解掉一小段多肽,轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄗ允审w)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估計(jì)自噬水平的高低。
b)利用Western Blot檢測(cè)p62蛋白來(lái)評(píng)價(jià)自噬以及自噬流的強(qiáng)弱:p62蛋白水平的多少與自噬流的強(qiáng)弱有著反比例關(guān)系。
3) 組織蛋白酶Cathepsin活力檢測(cè);
4) IF檢測(cè)自噬潮autophagic flux。


三、自噬研究常規(guī)思路
通常情況下,除了研究自噬現(xiàn)象本身,大家更多的是將自噬與各種生命活動(dòng)或者疾病結(jié)合起來(lái),把自噬作為這些方向的一個(gè)機(jī)制來(lái)研究。比如研究自噬如何參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、如何參與腫瘤的耐藥性與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、如何參與腫瘤免疫治療的效果、如何參與炎癥反應(yīng)、如何參與氧化應(yīng)激,如何參與自閉癥、阿爾茲海默癥的發(fā)生與治療等,通常的研究模式:
1)證明自噬參與了相關(guān)研究表型(電鏡、LC3II/I-WB、LC3亞細(xì)胞定位、LC3熒光示蹤監(jiān)測(cè)自噬流等)
2)證明自噬在表型中起到關(guān)鍵作用(通過(guò)自噬抑制劑、激動(dòng)劑進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究)
3)找到表型與自噬橋梁分子(檢測(cè)pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成員)
4)在基因?qū)用嫱ㄟ^(guò)gain of/lost of function研究橋梁分子在自噬中的作用。
遠(yuǎn)慕生物可以為客戶提供從自噬領(lǐng)域的課題設(shè)計(jì)到實(shí)驗(yàn)操作包括后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的整理等服務(wù)。


四、自噬相關(guān)研究領(lǐng)域
1)自噬起始和終止的分子機(jī)制
2)細(xì)胞自噬與腫瘤
3)細(xì)胞自噬與免疫
4)自噬參與炎癥信號(hào)通路的調(diào)節(jié)
5)細(xì)胞自噬與神經(jīng)退行性疾病
6)激活自噬促進(jìn)免疫化療和放療
7)表觀遺傳學(xué)與細(xì)胞自噬的關(guān)系
8)藥物治療自噬

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