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淺談“內(nèi)標(biāo)法”知識,實驗人收藏起來!
點擊次數(shù):1366 更新時間:2022-04-27
  內(nèi)標(biāo)法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標(biāo)法的優(yōu)點的一種方法,它在加入內(nèi)標(biāo)物后,按峰面積歸一法的分析方法進行分析,這就避免了由于進樣的一致性及樣品歧視效應(yīng)導(dǎo)致的偶然誤差。因而,它的分析精密度也是比較高的,是一種比較理想的定量分析方法。
 
  內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)缺點
 
  內(nèi)標(biāo)法對進樣量不嚴格要求,測定的結(jié)果也較為準(zhǔn)確,由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的,因而在一定程度上消除了進樣量、儀器不穩(wěn)定等變化所引起的誤差,只對欲分析的組分峰做校正。
 
  不過內(nèi)標(biāo)法必須加一個組分進到樣品,易增加面積測量誤差。操作程序較為麻煩,每次分析時內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量,有時尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。
 
  內(nèi)標(biāo)物的選擇原則
 
  采用內(nèi)標(biāo)法定量時,內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說,內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個能得到純樣的已知化合物,這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去,它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征,最好是被分析物質(zhì)的一個同系物。
 
  當(dāng)然,在色譜分析條件下,內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是,在少數(shù)情況下,分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個復(fù)雜過程中所得到的回收率,此時,他可以使用一種在這種過程中很容易被*回收的化合物作內(nèi)標(biāo),來測定感興趣化合物的百分回收率,而不必遵循以上所說的選擇原則。
 
  對于內(nèi)標(biāo)法定量分析來說,內(nèi)標(biāo)物的選擇必須滿足如下的條件
 
  1、內(nèi)標(biāo)物與被分析物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)要相似(如:沸點、極性、化學(xué)結(jié)構(gòu)等);
 
  2、內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì);
 
  3、它必須*溶于被測樣品(或溶劑)中,且不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng);并與試樣中各組分的色譜峰能*分離;
 
  4、能加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分;
 
  5、色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近,或在幾個被測組分色譜峰中間。且又不共溢出,目的是為了避免儀器的不穩(wěn)定性所造成的靈敏度的差異;
 
  6、選擇合適的內(nèi)標(biāo)物加入量,使得內(nèi)標(biāo)物和被分析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%,以免由于它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。
 
  需要指出的是,在少數(shù)情況下,分析人員可能比較關(guān)心化臺物在一個復(fù)雜過程中所得到的回收率,此時,可以使用在這過程中很容易被*回收的化臺物作內(nèi)標(biāo),來測定感興趣化合物的百分回收率,而不必遵循以上所說的選擇原則。
 
  內(nèi)標(biāo)法的操作
 
  將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品,制成混合標(biāo)樣,并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣。混合標(biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。
 
  注入色譜柱,以(標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積)為響應(yīng)值。
 
  根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系,即W=f×A,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
  將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品,注入色譜柱,得到欲測組分的響應(yīng)值。
 
  根據(jù)已知的系數(shù)f,即可求出欲測組分的濃度。
 
  操作過程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的,因此只要混合溶液中被測組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定,上樣體積的變化不會影響影響定量結(jié)果。內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積,乃至流動相、檢測器的影響,因此比外標(biāo)法精確。
 
  制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線
 
  在用內(nèi)標(biāo)法做色譜定量分析時,先配制一定重量比的被測組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析,測量峰面積,做重量比和面積比的關(guān)系曲線,此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實際樣品分析時所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時所用的條件一致,因此,在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時,不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等),還應(yīng)注明進樣體積和內(nèi)標(biāo)物濃度。在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時,各點并不*落在直線上,此時應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標(biāo)準(zhǔn)偏差,在使用過程中應(yīng)定期進行單點校正,若所得值與平均值的偏差小于2,曲線仍可使用,若大于2,則應(yīng)重作曲線,如果曲線在鉸短時期內(nèi)即產(chǎn)生變動,則不宜使用內(nèi)標(biāo)法定量。
 
  遠慕小結(jié):內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對的校準(zhǔn)方法。在分析測定樣品中某組分含量時,加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除出于操作條件的波動而對分析結(jié)果產(chǎn)生的影響,以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。
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