動(dòng)物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多,若非必要,可以無需做此操作。若必須做動(dòng)物血清的熱滅活,請(qǐng)嚴(yán)格遵守以下步驟:
1、保證血清*融化狀態(tài),溫度接近常溫。
2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則,在水浴過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使血清內(nèi)部受熱均勻,直至滅活時(shí)間結(jié)束。
注意事項(xiàng):
溫度過高、時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多,甚至嚴(yán)重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中,持續(xù)恒溫30分鐘。在此過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使其受熱均勻,減少蛋白的析出。
為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點(diǎn),常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
遠(yuǎn)慕生物解析血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
1. 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。
2. 證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
3. 有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。
4. 無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細(xì)菌噬菌體污染。
5. 對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。
6. 血清要通過濾膜過濾除菌,無菌