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遠慕分享微生物侵入檢測操作方法
點擊次數(shù):316 更新時間:2022-11-25

微生物侵入法,又稱微生物挑戰(zhàn)法,是一種較為常見的密封完整性測試方法,通常與模擬灌裝同時進行。通過按照模擬灌裝驗證方案進行培養(yǎng)基模擬灌裝,然后進行壓塞軋蓋后,目檢合格,經(jīng)已驗證的滅菌柜滅菌后,將容器密封面浸入到高濃度的菌液中,使樣品容器內的培養(yǎng)基充分接觸封口內表面,樣品的頸部及封口的外表面應完/全浸泡在菌懸液中,浸泡一定時間后取出,定期培養(yǎng)后檢查是否有微生物侵入,以確定容器密封系統(tǒng)的完整性。同時,需要做陽性對照試驗,確認培養(yǎng)基的促生長能力。

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一、微生物侵入法試驗方法

將新鮮的銅綠假單胞菌(Pswudomonas aeruginosa)ATCC9027的菌懸液倒入不銹鋼桶中。

1、將50個經(jīng)滅菌的試樣編號,完/全侵入菌懸液中,同時將袋平放,使袋內的無菌培養(yǎng)基充分接觸焊接部位的內表面,試樣容器在菌懸液中持續(xù)浸泡4小時。

2、浸泡結束時再取一份菌懸液,用平板計數(shù)菌懸液的濃度。

3、從菌懸液中取出試樣,擦干試樣容器外殘余的菌懸液,然后用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒容器外表面。

4、取裝滿培養(yǎng)基樣品兩個,作陽性對照,其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒,接種入10~100CFU銅綠假單胞菌,按步驟8.2進行培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗。

5、將挑戰(zhàn)試驗用的試樣培養(yǎng)7天,觀察檢查試樣容器內培養(yǎng)基中微生物的生長情況。有生長記作+,無生長記作-。如果試樣容器長菌,按8.2方法確認生長菌是挑戰(zhàn)微生物——銅綠假單胞菌;如果所有試樣容器都不長菌,則取10個試樣按8.2進行培養(yǎng)基的營養(yǎng)性試驗。

6、試驗結束后,挑戰(zhàn)試驗用菌懸液經(jīng)121℃30分鐘滅菌后丟棄。

二、微生物侵入法判斷標準

1、步驟2、步驟4、5中進行的營養(yǎng)性試驗都合格,試樣的挑戰(zhàn)試驗才有效。

2、在挑戰(zhàn)試驗開始時,挑戰(zhàn)用菌懸液濃度(活菌數(shù))必須達到1×106CFU/ml。

3、挑戰(zhàn)試驗中如長菌,需記錄長菌的試樣數(shù),并按下述要求作進一步調查。

4、仔細檢查容器各部位封口處是否有缺損,造成微生物浸入。

5、將觀察到試樣容器封口的缺陷,采用拍照詳細記錄。

6、如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致,試驗作失敗論處。



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