影響微生物發(fā)酵能否成功的因素有1、是菌種的選取。2、是菌體濃度的控制。3、是基質(zhì)的控制,包括碳源、氮源和磷酸鹽的量的控制。4、是溶氧量的控制。5、酸堿度的控制。下面是微生物發(fā)酵過程的一篇文章,希望對(duì)你有幫助!
微生物發(fā)酵過程即微生物反應(yīng)過程,是指由微生物在生長繁殖過程中所引起的生化反應(yīng)過程。
根據(jù)微生物的種類不同(好氧、厭氧、兼性厭氧),可以分為好氧性發(fā)酵和厭氧性發(fā)酵兩大類。
?。?)好氧性發(fā)酵 在發(fā)酵過程中需要不斷地通人一定量的無菌空氣,如利用黑曲霉進(jìn)行檸檬酸發(fā)酵、利用棒狀桿菌進(jìn)行谷an酸發(fā)酵、利用黃單抱菌進(jìn)行多糖發(fā)酵等等。
?。?)厭氧性發(fā)酵 在發(fā)酵時(shí)不需要供給空氣,如乳酸桿菌引起的乳酸發(fā)酵、梭狀芽抱桿菌引起的丙酮、丁醇發(fā)酵等。
?。?)兼性發(fā)酵 酵母菌是兼性厭氧微生物,它在缺氧條件下進(jìn)行厭氣性發(fā)酵積累酒精,而在有氧即通氣條件下則進(jìn)行好氧性發(fā)酵,大量繁殖菌體細(xì)胞。
按照設(shè)備來分,發(fā)酵又可分為敞口發(fā)酵、密閉發(fā)酵、淺盤發(fā)酵和深層發(fā)酵。
一般敞口發(fā)酵應(yīng)用于繁殖快并進(jìn)行好氧發(fā)酵的類型,如酵母生產(chǎn),由于其菌體迅速而大量繁殖,可抑制其他雜菌生長。所以敞口發(fā)酵設(shè)備要求簡單。相反,密閉發(fā)酵是在密閉的設(shè)備內(nèi)進(jìn)行,所以設(shè)備要求嚴(yán)格,工藝也較復(fù)雜。淺盤發(fā)酵(表面培養(yǎng)法)是利用淺盤僅裝一薄層培養(yǎng)液,接人菌種后進(jìn)行表面培養(yǎng),在液體上面形成一層菌膜。在缺乏通氣設(shè)備時(shí),對(duì)一些繁殖快的好氧性微生物可利用此法。深層發(fā)酵法是指在液體培養(yǎng)基內(nèi)部(不僅僅在表面)進(jìn)行的微生物培養(yǎng)過程。
液體深層發(fā)酵是在青霉su等抗生素的生產(chǎn)中發(fā)展起來的技術(shù)。同其他發(fā)酵方法相比,它具有很多優(yōu)點(diǎn):
?、僖后w懸浮狀態(tài)是很多微生物的最適生長環(huán)境。
②在液體中,菌體及營養(yǎng)物、產(chǎn)物(包括熱量)易于擴(kuò)散,使發(fā)酵可在均質(zhì)或擬均質(zhì)條件下進(jìn)行,便于控制,易于擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模。
?、垡后w輸送方便,易于機(jī)械化操作。
④廠房面積小,生產(chǎn)效率高,易進(jìn)行自動(dòng)化控制,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
?、莓a(chǎn)品易于提取、精制等。因而液體深層發(fā)酵在發(fā)酵工業(yè)中被廣泛應(yīng)用。
1.2.1 工業(yè)生產(chǎn)常用微生物
微生物資源非常豐富,廣布于土壤、水和空氣中,尤以土壤中為最多。有的微生物從自然界中分離出來就能夠被利用,有的需要對(duì)分離到的野生菌株進(jìn)行人工誘變,得到突變株才能被利用。當(dāng)前發(fā)酵工業(yè)所用菌種的總趨勢是從野生菌轉(zhuǎn)向變異菌,從自然選育轉(zhuǎn)向代謝控制育種,從誘發(fā)基因突變轉(zhuǎn)向基因重組的定向育種。工業(yè)生產(chǎn)上常用的微生物主要是細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌,由于發(fā)酵工程本身的發(fā)展以及遺傳工程的介人,藻類、病毒等也正在逐步地變?yōu)楣I(yè)生產(chǎn)用的微生物。其他微生物有擔(dān)子菌、 藻類。
1.2.2. 培養(yǎng)基
1.2.2.1 培養(yǎng)基的種類
培養(yǎng)基是人們提供微生物生長繁殖和生物合成各種代謝產(chǎn)物需要的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的成分和配比,對(duì)微生物的生長、發(fā)育、代謝及產(chǎn)物積累,甚至對(duì)發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)工藝都有很大的影響。依據(jù)其在生產(chǎn)中的用途,可將培養(yǎng)基分成抱子培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基等。
?。?)抱子培養(yǎng)基 抱于培養(yǎng)基是供制備泡子用的。
?。?)種于培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基是供抱子發(fā)芽和菌體生長繁殖用的。
?。?)發(fā)酵培養(yǎng)基 發(fā)酵培養(yǎng)基是供菌體生長繁殖和合成大量代謝產(chǎn)物用的。
1.2.2.2 發(fā)酵培養(yǎng)基的組成
發(fā)酵培養(yǎng)基的組成和配比由于菌種不同。設(shè)備和工藝不同以及原料來源和質(zhì)量不同而有所差別。因此,需要根據(jù)不同要求考慮所用培養(yǎng)基的成分與配比。 但是綜合所用培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,不外乎是碳源(包括用作消泡劑的油類)、氮源、無機(jī)鹽類(包括微量元素)、生長因子、水、產(chǎn)物形成的誘導(dǎo)物、前體和促進(jìn)劑等幾類。
1.2.3 發(fā)酵的一般過程
生物發(fā)酵工藝多種多樣,但基本上包括菌種制備、種子培養(yǎng)、發(fā)酵和提取精制等下游處理幾個(gè)過程。典型的發(fā)酵過程如圖4-1所示。以下以霉菌發(fā)酵為例加以說明。
1.2.3.1 菌種
在進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)之前,公先必須從自然界分離得到能產(chǎn)生所需產(chǎn)物的菌種,并經(jīng)分離、純化及選育后或是經(jīng)基因工程改造后的"工程菌".才能供給發(fā)酵使用。為了能保持和獲得穩(wěn)定的高產(chǎn)菌株,還需要定期進(jìn)行菌種純化和育種,篩選出高產(chǎn)量和高質(zhì)錄的優(yōu)良菌株。
1.2.3.2 種子擴(kuò)大培養(yǎng)
種子擴(kuò)大培養(yǎng)是指將保存在砂上管。冷凍干燥管或冰箱中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種,接入試管斜面活化后,再經(jīng)過茄子瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種的過程。這些純種培養(yǎng)物稱為種子。
發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)量與成品的質(zhì)量,與菌種性能以及抱于和種子的制備情況密切相關(guān)。先將貯存的菌種進(jìn)行生長繁殖,以獲得良好的抱子,再用所得的抱子制備足夠量的菌絲體,供發(fā)酵罐發(fā)酵使用。種子制備有不同的方式,有的從搖瓶培養(yǎng)開始,將所得搖瓶種于液接入到種子罐進(jìn)行逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng),稱為菌絲進(jìn)罐培養(yǎng);有的將泡了百接接人種子罐進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),稱為抱子進(jìn)罐培養(yǎng)。采用哪種方式和多少培養(yǎng)級(jí)數(shù),取決于菌種的性質(zhì)。生產(chǎn)規(guī)模的人小和生產(chǎn)廠藝的特點(diǎn),種于制備一般使用種于罐,擴(kuò)人培養(yǎng)級(jí)數(shù)通常為二級(jí)。種廠制備的工藝流程如圖4-2所示示。對(duì)于不產(chǎn)孢子的菌種,經(jīng)試管培養(yǎng)直接得到菌體,再經(jīng)搖瓶培養(yǎng)后即可作為種子罐種子。
1.2.3.3 發(fā)酵
發(fā)酵是微生物合成大量產(chǎn)物的過程,是整個(gè)發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)。它是在無菌狀態(tài)下進(jìn)行純種培養(yǎng)的過程。因此,所用的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備都必須經(jīng)過滅菌,通人的空氣或中途的補(bǔ)料都是無菌的,轉(zhuǎn)移種子也要采用無菌接種技術(shù)。通常利用飽和蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌,滅菌條件是在120℃(約0.IMPa表壓)維持20~30min??諝獬鷦t采用介質(zhì)過濾的方法,可用定期滅菌的干燥介質(zhì)來阻截流過的空氣中所含的微生物,從而制得無菌空氣。發(fā)酵罐內(nèi)部的代謝變化(菌絲形態(tài)、菌濃、糖、氮含量、pH值,溶氧濃度和產(chǎn)物濃度等)是比較復(fù)雜的,特別是次級(jí)代謝產(chǎn)物發(fā)酵就更為復(fù)雜,它受許多因素控制。
1.2.3.4 下游處理
發(fā)酵結(jié)束后,要對(duì)發(fā)酵液或生物細(xì)胞進(jìn)行分離和提取精制,將發(fā)酵產(chǎn)物制成合乎要求的成品。