自1931世界shang第1臺電子顯微鏡誕生以來,微觀世界的大門開放的更加廣闊。目前電鏡被廣泛運用于各器官系統(tǒng)疾病的病理診斷中,除了運用在腫瘤的診斷與鑒別診斷中,用得最多的是腎臟活檢和某些皮膚疾病的診斷,其中透射電子顯微鏡是最早,最guang泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一種電鏡。隨著電鏡在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用,人類通過觀察細胞膜和細胞漿內(nèi)的各種細胞器和細胞核的細微結(jié)構(gòu)及其病理變化,由此產(chǎn)生了亞細胞結(jié)構(gòu)病理學(xué)(substructural pathology),又稱超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)(ultrastructural pathology)。
下面遠慕為大家介紹電鏡生物樣品固定液的選擇及其配方:
1、緩沖液的配制
在配制固定液之前,應(yīng)先配制緩沖液。
0.2M磷酸緩沖液的配制:
磷酸2氫鈉(NaH2PO4.H2O) 2.6g
磷酸氫2鈉(Na2HPO4.12H2O) 29g
重蒸餾水加至500ml
調(diào)pH至7.4
2、(灌注)固定液的配制
4%多聚甲醛:用0.2M磷酸緩沖液配制,重蒸餾水補足容積。
4%多聚甲醛+(0.5-2%)戊二醛,以4%多聚甲醛+1%戊二醛為例,配方如下:
0.2M磷酸緩沖液的配制 100ml
25%戊二醛(電鏡專用) 4ml
重蒸餾水加到200ml
多聚甲醛和戊二醛混合固定液配制方法:
(1)4%多聚甲醛+5%戊二醛:溶解2g多聚甲醛于25ml雙蒸水中,80℃水浴,搖動使之溶化后加1-3滴1M NaOH,使溶液澄清。冷卻后加10ml 25%戊二醛,再加15ml 0.2PB,調(diào)pH備用。此固定液中含多聚甲醛4%,戊二醛5%,屬高滲液,但固定效果不錯,尤其對細胞內(nèi)的微管保存較好。
(2)2%多聚甲醛+2%戊二醛:溶解1g多聚甲醛于25ml雙蒸水中,80℃水浴,搖動使之溶化后加1-3滴1M NaOH,使溶液澄清。冷卻后加4ml 25%戊二醛,再加21ml 0.2PB,調(diào)pH備用。常規(guī)固定選用這種配方。
(3)4%多聚甲醛+0.5%戊二醛:溶解2g多聚甲醛于25ml雙蒸水中,80℃水浴,搖動使之溶化后加1-3滴1M NaOH,使溶液澄清。冷卻后加1ml 25%戊二醛,再加24ml 0.2PB,調(diào)pH備用。推薦用作免疫電鏡標本固定劑,對于抗原較強的標本,可將濃度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。