細(xì)菌鑒定的酶類試驗(yàn)是細(xì)菌的生化反應(yīng)中酶類的存在與否等生化特性,這些反應(yīng)能夠?qū)е路磻?yīng)體系的PH值變化或產(chǎn)生顯色物質(zhì),加入合適的酸堿指示劑或顯色劑就可以反映出來(lái)。
氧化酶試驗(yàn)
氧化酶(細(xì)胞色素氧化酶)是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌,首先使細(xì)胞se素C氧化,再由氧化的細(xì)胞se色素C使對(duì)苯二胺氧化,生成有色的醌類化合物。
試驗(yàn)方法
1)菌落法:直接滴加氧化酶試劑于被檢菌菌落上;
2)濾紙法:取潔凈濾紙一小塊,蘸取菌少許,然后加氧化酶試劑;
3)試劑紙片法:將濾紙片浸泡于氧化酶試劑中制成試劑紙片,取菌涂于試劑紙上。
結(jié)果判讀
細(xì)菌在與試劑接觸10s內(nèi)呈深紫色,為陽(yáng)性。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,分別以銅綠假單胞菌和大腸埃希菌作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
臨床應(yīng)用及意義
主要用于腸桿菌科細(xì)菌與假單胞菌的鑒別,前者為陰性,后者為陽(yáng)性。奈瑟菌屬、莫拉菌屬細(xì)菌也呈陽(yáng)性反應(yīng)。此外,也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細(xì)菌的區(qū)別,前者陽(yáng)性,而后者陰性。產(chǎn)堿桿菌屬等均為陽(yáng)性。
異常結(jié)果: 奈瑟菌屬有腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9種致病菌,引起流行性腦脊髓膜炎
上呼吸道癥狀:鼻咽炎等全身感染癥狀:高熱、出血點(diǎn)或瘀血點(diǎn),腦膜炎癥狀:頭痛、嘔吐、頸項(xiàng)強(qiáng)直;引起淋病,引起新生兒淋病性眼結(jié)膜炎。
觸酶試驗(yàn)
觸酶又稱過(guò)氧化氫酶,具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌,能催化過(guò)氧化氫成為水和原子態(tài)氧,繼而形成氧分子,出現(xiàn)氣泡。大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶,但鏈球菌科陰性,故常用此試驗(yàn)來(lái)鑒定。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗(yàn),結(jié)核分枝桿菌為陰性,戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽(yáng)性。
試驗(yàn)方法
取潔凈玻片1張,用接種環(huán)挑取細(xì)菌,加3%的H2O2 1滴,立即觀察結(jié)果。
結(jié)果判讀
若立即出現(xiàn)大量氣泡為陽(yáng)性。無(wú)氣泡為陰性。
臨床應(yīng)用及意義
大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶,但鏈球菌科陰性,故常用此試驗(yàn)來(lái)鑒定。此外,金氏桿菌屬的細(xì)菌也為陰性。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗(yàn),結(jié)核分枝桿菌為陰性,戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽(yáng)性。
注意事項(xiàng)
① 試驗(yàn)時(shí)應(yīng)避免接觸含鐵物質(zhì),以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。
② 10g/L鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或10g/L鹽酸四甲基對(duì)苯二胺水溶液為無(wú)色溶液,在空氣中易被氧化而失效,故應(yīng)經(jīng)常更換新試劑,并盛于棕色瓶中,若試劑已變成深藍(lán)色,應(yīng)棄去不用。